采集樣品時的主要考慮因素

• 血清： 采集全血后，在室溫下放置 1 小時或在 2-8°C 下儲存過夜。將樣品在 2-8°C 下以 1000× g 離心 20 分鐘，然后收集上清液進行檢測。
• 血漿：考慮到抗凝機制和下游應用，選擇必要的抗凝劑。例如：
• EDTA（乙二胺四乙酸）：通過結(jié)合鈣離子防止凝血，適用于免疫學測定和細胞計數(shù)。
• 肝素：通過抑制凝血酶和凝血因子來防止凝血，是生化測定和蛋白質(zhì)分析的理想選擇。
• 檸檬酸鈉：適合用于凝血實驗，因為它能結(jié)合鈣離子。

以下是使用 EDTA 的示例：使用真空采集針和無菌管采集新鮮血液，使用 EDTA-Na? 作為推薦的抗凝劑。在 2-8°C 下以 1000× g 離心樣品 30 分鐘內(nèi)離心 15 分鐘，并收集上清液進行檢測。

• 細胞培養(yǎng)上清液：將收集的上清液在 2-8°C 下以 1000× g 離心 20 分鐘，以去除顆粒和細胞碎片。收集上清液進行測試。

• 組織勻漿：用預冷的 PBS（0.01M，pH=7.4）沖洗組織以去除殘留的血液，稱量組織，然后將其切碎。
  將切碎的組織加入具有適當體積 PBS 的玻璃勻漿器中（通常使用 1：9 w/v 比率）。
  在冰上勻漿組織，并通過凍融或超聲處理進一步破壞細胞。
  將勻漿在 2-8°C 下以 5000× g 離心 5-10 分鐘，然后收集上清液進行檢測。

• 細胞裂解物：用冷 PBS 洗滌貼壁細胞，然后用胰蛋白酶消化它們。以 1000×g 離心 5 分鐘收集細胞，然后用冷 PBS 洗滌 3 次。對于每 10^6 個細胞，添加 150-200 μL PBS（必要時加入蛋白酶抑制劑），通過凍融或超聲處理裂解。將裂解液在 2-8°C 下以 1500×g 離心 10 分鐘。 收集上清液進行測試。

• 條件培養(yǎng)基：在完全生長培養(yǎng)基（含血清）中將細胞生長至所需的匯合度。取出生長培養(yǎng)基，用溫熱的 PBS 洗滌細胞數(shù)次。更換為無血清培養(yǎng)基，并將細胞孵育 1-2 天。收集培養(yǎng)基并在 4°C 下以 1500 rpm 離心 10 分鐘。上清液可用于檢測。
  
• 唾液：在至少 30 分鐘不進食、不飲水或不刷牙后收集唾液。將樣品在 2-8°C 下以 4000× g 離心 10 分鐘，以去除雜質(zhì)并收集上清液進行檢測。

• 尿：在無菌管中收集中游晨尿，在 2-8°C 下以 1000× g 離心樣品 15-20 分鐘以去除碎片，并收集上清液進行檢測。

• 糞便：將樣品與 PBS（0.01M，pH=7.4）以 9 mL/g 的比例混合，在冰上搖動 15 分鐘，然后在 2-8°C 下以 5000× 離心 5-10 分鐘。 收集上清液進行測試。

• 骨髓：使用抗凝劑，并在采集后 30 分鐘內(nèi)在 2-8°C 下以 1000× g 離心 15 分鐘。收集上清液進行測試。

• 貧血小板血漿：使用 EDTA、肝素或檸檬酸鹽作為抗凝劑收集血漿。收集后 30 分鐘內(nèi)以 1000× g 離心 15 分鐘。在 2-8°C 下，對 10,000 × g 血漿進行額外離心 10 分鐘，以去除血小板。上清液可用于檢測。

• 母乳：將樣品在 2-8°C 下以 1000× g 離心 15 分鐘。 收集水性組分并重復此離心步驟共 3 次。然后可以使用上清液進行檢測。

樣本收集筆記

1. 采集血樣時應盡可能避免溶血。
2. 采集抗凝全血后，輕輕倒置試管以確保完全抗凝，防止部分血液未與抗凝劑接觸而導致凝血。
3. 在收集組織和細胞提取物樣品時，不建議使用市售裂解緩沖液。裂解緩沖液中的表面活性劑可能會影響分析物的天然構(gòu)象，可能導致測量結(jié)果顯著減少或假陰性。此外，由于引入了一種新的溶劑，潛在的基質(zhì)干擾是不確定的，這可能會增加背景水平并影響測量準確度。
4. 避免使用高脂血癥樣本。高脂肪樣品含有脂質(zhì)，不是均質(zhì)溶液。如果直接應用，它們可能會干擾抗原抗體結(jié)合，從而影響測量準確性。
5. 如果要在一周內(nèi)檢測樣品，請將其儲存在 2-8°C 下。 如果不能及時進行檢測，請根據(jù)使用量將樣品分裝，并儲存在 -20°C 或 -80°C 下，以避免重復凍融循環(huán)。

特別提示：導致樣品溶血的原因以及如何避免

在樣品處理中，溶血是指紅細胞破裂，將血紅蛋白釋放到血清或血漿中。溶血可由各種物理、化學和毒性因素引起。在體外，機械攪拌或低溫冷凍會導致溶血。

溶血發(fā)生后，內(nèi)源性 HRP 酶和血紅蛋白的過氧化物酶樣活性可導致 ELISA 中不受控制的非特異性染色，影響結(jié)果的準確性。如果樣品輕微溶血，建議在與標準品孵育后洗滌板 1-3 次，以盡量減少干擾。如果發(fā)生嚴重溶血，建議收集新樣本。

為避免溶血影響檢測結(jié)果，確保靜脈穿刺壓力不要太高，避免采集過小的血液，輕拿采集的血樣避免劇烈搖晃，不要以過高的速度離心，及時將采集的全血加工成血清/血漿，避免凍融全血。如果采血需要麻醉，請使用不會引起溶血的麻醉劑。