大腸桿菌細胞廣泛用于生物制藥的生產(chǎn)。在藥物開發(fā)過程中，殘留宿主細胞蛋白（HCP）的分析對于確保生物制藥的質(zhì)量和**性非常重要。對于大腸桿菌，HCP模式受應用的生產(chǎn)條件的強烈影響。僅使用一組抗體的傳統(tǒng)通用檢測方法并不能充分代表這種多樣性。為了克服與傳統(tǒng)通用HCP檢測相關的局限性，BioGenes開發(fā)了增強型通用大腸桿菌|360-HCP ELISA，它由一組四種不同的通用試劑盒組成。

大腸桿菌|360-HCP ELISA 是一種增強型通用宿主細胞蛋白 （HCP） 檢測。與其他市售的通用 HCP 檢測相比，它旨在涵蓋更廣泛的大腸道菌宿主細胞蛋白 （HCP）。

大腸桿菌|360-HCP ELISA 基于 W3110 和 BL21 （DE3） 細胞系，它們在不同的培養(yǎng)基和條件下發(fā)酵，產(chǎn)生具有不同 HCP 模式的幾種抗原制劑。通過用這些抗原對山羊（C型）或兔子（A型、D型和E型）進行免疫接種，BioGenes開發(fā)了一組不同的HCP ELISA試劑盒，這些試劑盒共同構建了增強型通用大腸桿菌|360-HCP ELISA。

抗體制劑的高特異性通過覆蓋≥ 80% 的大腸桿菌|360-HCP 抗原分布得到證明。使用 Cy5 標記的大腸桿菌|360-HCP 標準品和相應的 Cy3 標記的抗 HCP 抗體，通過 2D 蛋白質(zhì)印跡測量抗原覆蓋率。

在檢測工作范圍內(nèi)，在加標抗原的接受標準 100±30% 內(nèi)，加標樣品的回收率令人滿意。大腸桿菌|360-HCP ELISA試劑盒的高靈敏度，由驗證參數(shù)LOD、LOQ和工作范圍描述，如下所示：

? LOD ： 0.2 – 0.5 ng/mL

? LOQ ： 0.6 – 1.6 ng/mL

? 工作范圍：2 – 100 ng/mL

大腸桿菌中的HCP模式受許多因素的影響

1）大腸桿菌菌株的遺傳背景

不同大腸桿菌菌株的基因組顯示出顯著的多樣性。典型的大腸桿菌基因組編碼約4,500-5,000個基因，其中約50%的基因在核心基因組中占有一席之地。據(jù)估計，大腸桿菌的泛基因組包括大約128,000個基因，因此攜帶著大量潛在的HCP物種。

2）細胞培養(yǎng)條件

大腸桿菌的基因表達高度依賴于細胞的生長階段、培養(yǎng)基和補充劑的類型以及生長條件。**代謝途徑的重組、應激相關基因的表達和底物降解酶的分泌主要受營養(yǎng)物質(zhì)的可用性和細胞應激條件（如溫度、氧氣和鹽度）的存在的影響。

3）重組藥物的性質(zhì)

重組（外來）蛋白的過表達可導致重組菌株的蛋白質(zhì)組相對于代謝功能蛋白、伴侶蛋白和熱休克蛋白的表達模式發(fā)生顯著變化。

為什么選擇四種套件類型？

所有這些條件共同影響大腸桿菌發(fā)酵過程中發(fā)生的獨特 HCP 特征，并且沒有一個通用試劑盒能夠檢測出每個 HCP。

大腸桿菌|360-HCP ELISA 可提高檢測特異性和靈敏度，使用不同的抗 HCP 抗體組，分為四種試劑盒類型（A 型、C 型、D 型、E 型），以優(yōu)化 HCP 檢測。

? 大腸桿菌抗原的遺傳背景：BL21 （DE3） & W3110

? 發(fā)酵培養(yǎng)基：LB培養(yǎng)基和礦物培養(yǎng)基

由于預測大腸桿菌中HCP譜的困難，我們建議首先測試所有四種試劑盒類型，然后根據(jù)ELISA關鍵參數(shù)（如稀釋線性、準確性和總覆蓋率）選擇性能*佳的試劑盒。 

通用 ELISA 試劑盒的生成如何

每種增強型通用HCP ELISA試劑盒的生產(chǎn)涉及以下步驟：

? 使用特定抗原材料對個人進行免疫接種

? 多克隆抗體的分離和純化

? 即用型ELISA試劑盒的生產(chǎn)

每種試劑盒類型的抗體將對總蛋白質(zhì)譜的子集表現(xiàn)出特異性反應性，并且對給定菌株/細胞系的其他蛋白質(zhì)表現(xiàn)出弱反應性或無反應性。與總蛋白質(zhì)相比，被識別的蛋白質(zhì)比例稱為覆蓋率。

如何選擇*合適的套件？

每個藥物制造過程都會產(chǎn)生特定的 HCP 特征。為了實現(xiàn)*佳的 HCP 監(jiān)測，應應用*佳擬合測試。如圖所示，與底部試劑盒相比，上部試劑盒的抗體組合覆蓋了示例性項目樣本中更廣泛的 HCP。因此，由于整體覆蓋率更高，上層試劑盒將是監(jiān)測 HCP 減少情況的更好選擇。為了鑒定*適合的通用 360 HCP ELISA 試劑盒，BioGenes 建議對

關鍵 HCP ELISA 性能標準

? HCP 覆蓋率

? 充分減少 HCP 對數(shù)

? ELISA準確度

? 樣品稀釋線性度

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